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ESPECTROFOTOMETRÍA
📝En este artículo encontrarás:
Definición de Espectrofotometría:
La
Espectrofotometría es una de las técnicas experimentales más utilizadas para la
detección específica de moléculas. Se caracteriza por su precisión,
sensibilidad y su aplicabilidad a moléculas de distinta naturaleza
(contaminantes, biomoléculas), y estado de agregación (sólido, líquido, gas).
Los fundamentos fisicoquímicos de la espectrofotometría son relativamente
sencillos.
Figura N°01: Componentes de Espectrofotómetro.
§
Espectrofotometría de Absorción.
En estos
casos se mide la Absorbancia (A) del analito, esto es la luz absorbida por el
analito, y esta magnitud se relaciona con la concentración (C).
Donde: La
Absorbancia es Directamente Proporcional a la Concentración.
§ Espectrofotometría
de emisión.
En este
caso se mide la luz emitida por un analito previamente excitado, la señal
emitida se relaciona con la concentración de la especie que emite luz cuando
vuelve desde un estado excitado (estado de mayor energía al que llegó
absorbiendo energía) a su estado basal (estado de menor energía posible tal
como se encuentra naturalmente).
Espectrofotometría y los Análisis en Laboratorio.
Las ventajas de la espectrofotometría sobre otros métodos analíticos de laboratorio son varias: es rápida, precisa, versátil, fácil de usar y eficiente en costo. Los espectrofotómetros se han mejorado en precisión y versatilidad en los últimos años con los avances de tecnología, y hoy se consideran indispensables en un laboratorio de química analítica.
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Aplicaciones de la Espectrofotometría.
§ Análisis cuantitativo y cualitativo de soluciones desconocidas en un laboratorio de investigación,
§ Estandarización de colores de diversos materiales, como plásticos y pinturas,
§ Detección de niveles de contaminación en aire y agua,
§ Determinación de trazas de impurezas en alimentos y en reactivos.
§ Composición química cuantitativa y/o cualitativa.
§ Color.
§ Espesor de capa.
El gran beneficio de la aplicación de la espectrometría en el análisis de procesos es que monitoriza y optimiza simultáneamente la totalidad de todos los procesos de producción y los productos procesados en ellos. Para satisfacer estos requisitos, un espectrómetro necesita, sobre todo:
§ Un rendimiento de medición continuo.
§ Una construcción robusta.
§ Una integración fácil.
Dado que los datos de medición univariados (como temperatura, pH, etc.) no pueden describir un proceso de fabricación con suficiente precisión, se requieren datos en forma multidimensional o multivariante. Solo entonces se puede realizar un análisis de proceso óptimo.
§
y compleja generación de información (almacenada como espectros), en la que se contiene información
tanto química
como morfológica.
§ Análisis Multicomponente. Los métodos espectroscópicos permiten la determinación simultánea de
múltiples parámetros.
§ Alta Precisión: Los sensores de alta calidad, la alta resolución espectral y el software de al
rendimiento permiten una precisión de medición
sin precedentes en unos momentos.
§ No Destructivo. Los sistemas espectroscópicos permiten el análisis no invasivo y no destructivo de
objetos
§ Sin Contacto. Los métodos espectroscópicos no tienen que estar necesariamente en contacto directo
con el objeto de medición.
Laboratorio de Espectrofotometría y nanomateriales:
En este laboratorio trabaja la caracterización de
materiales nanoestructurados metálicos de oro, plata y hierro (control de
tamaño y morfología). Aplicaciones de materiales nanoestructurados en la
biomedicina. Investigación en el diseño de nanomateriales para su posible
aplicación en terapia fototérmica. Diseño de sustratos para su aplicación en
espectroscopia Raman amplificada por superficie, para la detección de
biomoléculas y pesticidas.
Equipos Utilizados en el Laboratorio
§ Espectrómetro (Andor Technology, 500 mm distancia focal, UV-VIS-NIR).
§ Espectrómetro portátil Uv-Vis (StellarNet), Lock-In Amplificador.
§ Láser de Argón (457, 488, 514 nm) diodos láser (473, 532, 780, 1200 nm).
§ Detector IN (HgCdTe), CCD para fluorescencia.
§ Purificador de agua milli-Q.
Densidad Óptica:
El cambio
entre la intensidad de luz que incide en el cultivo (Io) y la transmitida (I)
se registra en el espectrofotómetro como absorbancia (A) o densidad óptica
(D.O.), valor derivado del log del cociente entre Io y la de la luz transmitida
por la suspensión, A =
log Io/I.
Para la
realización de la curva de crecimiento de P. fluorescens se empleó un frasco
Erlenmeyer conteniendo 200 ml de caldo nutritivo estéril que se inoculó con una
suspensión bacteriana en fase exponencial de crecimiento con una concentración
suficiente par a que la
densidad óptica inicial a 600 nm corresponda a 0,10 (4,9 x 106 UFC/ml).
